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[자연과학]實驗보고서 - PCR의 원리를 배우고 전기영동을 이용하여 DNA band를 확인해보는 實驗[PCR검사]

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작성일18-05-17 04:40

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높은 온도일수록 단일가닥 DNA로 잘 이행되지만 Taq DNA 중합효소도 온도가 아주 높은 상태에서는 변성되어 사용하지 못하게 될 수 있으므로 보통 94℃로 한다. 가장 큰 長點으로는 소량의 시료로도 원하는 DNA서열을 엄청난 양과 높은 정확도로 증폭 시킬 수 있다는 점이다.
이중나선을 이루는 두가닥의 DNA는 서로 반대 방향으로 구성되어 있다아
Central dogma(중심원리)

유전정보가 DNA에서 RNA로 다시 단백질로 일방적 흐름에 따라 전달된다는 원리이다. 따라서 G+C 비율에 따라 결합온도에 變化를 주는 것이 좋다. 복제는 반드시 5‘→3’로 진행된다

전사(tran스크립트ion) : DNA를 원본으로 사용하여 RNA를 만드는 과정을 말한다. 첫 번째 주기에서는 확실한 변성을 위해 5분간 지속.

Annealing : 50℃~65℃에서 진행된다 Primer가 자신의 염기서열과 상보적인 염기 서열을 갖고 있는 DNA에 결합하는 단계이다.
PCR(polymerase chain reaction)

중합효소 연쇄反應 (PCR)은 genome DNA내에 target DNA 서열의 …(생략) 증폭에 기초를 두고 있는방법으로, DNA polymerase를 이용하여 DNA의 양을 증폭시키는 기술이다.

복제(replication) : 원본 DNA를 새로운 두 DNA로 만드는 과정이며, DNA polymerase 가 역할을 수행한다.
PCR materials

Template DNA : 증폭 대상이 되는 DNA이다. Primer를 만드는 것도 이 결합 온도(Annealing Temperature)를 고려하여 합성해야 한다. 염기간의 결합은 G와 C는 세군데에서 수소결합이 일어나고, A와T는 두 군데에서 결합이 일어나므로 G-C결합이 A-T결합보다 강하다.

실험 이론(理論)

DNA(deoxyribonucleic acid) :

핵산(nucleic acid)의 일종으로, 세포내에서 생물의 유전정보를 보관하는 물질
이중나선구조를 이루며 각 나선은 뼈대와 염기로 구성된다
뼈대는 단당류인 디옥시리보스(deoxyribose)에 인산기(phosphate)가 결합된 형태이다.

Cycle의 수가 30cycle이면, PCR product는 2³개다. tRNA가 mRNA의 정보를 판독하여 알맞은 아미노산을 가져온다. 70℃~74℃에서 시행하며 원하는 PCR산물의 크기가 크거나 反應요소의 농도가 낮을 때에는 시간을 연장시킬 수도 있다아 Taq 중합효소는 보통 1분에 2000~4000 염기쌍을 중합할 수 있으므로 원하는 PCR산물의 크기 1kb마다 1분 정도의 시간을 배당하면 충분히 反應이 일어난다.
염기(base) 퓨린 : 아데닌(A), 구아닌(G)
피리미딘 : 시토신(C), 티민(T), 우라실(U)
복제는 5‘→3’방향으로 진행된다
인산기가 연결된 방향을 5‘, 하이드록시기가 붙어있는 방향을 3’라고 한다. RNA polymerase가 역할을 수행하며 전사에서는 T가 U로 치환한다.
PCR step
Denaturation : 92℃~95℃로 가열하여 이중가닥 DNA를 단일가닥 DNA로 분리시킨다.

Primer pair : template DNA가운데 선택적으로 증폭시키고자 하는 target DNA의 양 끝에 상보적

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설명


다.

번역(translation) : mRNA정보를 판독하여 리보솜에서 20종류의 아미노산 배열로 변환 하는 과정, 유전정보가 최종적으로 단백질로 합성되는 과정이다.

Extension(〓Polymerization) : ssDNA를 template로 dsDNA를 합성하기 처음 하는 단계이다.[자연과학]實驗보고서 - PCR의 원리를 배우고 전기영동을 이용하여 DNA band를 확인해보는 實驗[PCR검사]

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실험결과/전기전자
PCR 검사
실험 목표

DNA와 PCR에 대하여 이해하고 직접 특정 유전자를 증폭 해 본다.

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